Publicerad 16 juli 2026 kl 09:27
Modern cellbiologi och molekylär medicin bygger på MULTIPLEX-FLUORESCENS: multiple protein av intresse markeras med olika färg-fluoroforer i samma cell, och visualiseras SAMTIDIGT (eller i snabb sekvens) för att studera hur olika proteinerna interagerar rumsligt.
Standard multi-färg-scheman:
- Två färger: GFP (grön, exk 488 nm) + mCherry (röd, exk 587 nm).
- Tre färger: DAPI (blå cellkärnor) + GFP (grön) + mCherry (röd).
- Fyra färger: DAPI + GFP + mCherry + Cy5 (djupt-rött).
- Fem-och-fler: DAPI + GFP + Alexa 546 + mCherry + Cy5 + Cy7.
Att avbilda flera färger samtidigt kräver att fluorescens-mikroskopet har korrekta EXKITATIONS- och EMISSIONS-filter för varje färg. Traditionellt betyder detta antingen:
- Ett mikroskop med FLERA filter-kuber, ROTERAS mekaniskt mellan olika färger.
- Ett KONFOKAL-mikroskop med multi-laser + spektralt-agilt emissions-system (500 000-2 000 000 kr).
Dino-Lite AM4517MT-GRFBY löser problemet med en fysikaliskt smart design: DUAL-BANDPASS emissions-filter + växelbar dual-exkitation. Ett enda instrument, hela multiplex-arbetsflödet.
Dual-bandpass emissions-filter — nyckel-innovation
Emissions-filter är kritiska för fluorescens-mikroskopi: de BLOCKERAR exkitations-ljus (som är miljontals gånger starkare än fluorescens-emission) och släpper igenom bara emissionens våglängd.
Standard-single-band-filter (t.ex. den 480/510-filter som beskrivits på o-se) släpper igenom bara EN emissions-våglängd (typ 505-540 nm för GFP).
Dual-bandpass-filter släpper igenom TVÅ separata våglängds-intervall SAMTIDIGT:
- 505-535 nm: GRÖN-emission (GFP, FITC, Alexa 488, Fluo-4).
- 610-650 nm: RÖD-emission (mCherry, Alexa 594, TRITC, Cy3.5).
Detta betyder att sensorn kan fånga BÅDA färgerna i samma bild — om båda excitations-ljus är på simultant.
Växelbar dual-exkitation 465 nm + 580 nm
Kompletterande komponent: två separata LED-uppsättningar för exkitation:
- 465 nm blå-LEDs: Optimal för GFP-exkitation (peak 488 nm).
- 580 nm gul-grön-LEDs: Optimal för mCherry-exkitation (peak 587 nm).
Mjukvara-kontrollerad växling:
Mode 1: GFP-only: Slå på 465 nm-LEDs. mCherry exciteras inte (inte inom absorption-band). Sensor ser bara grön-emission genom 505-535 nm-delen av dual-filtret.
Mode 2: mCherry-only: Slå på 580 nm-LEDs. GFP exciteras inte. Sensor ser bara röd-emission genom 610-650 nm-delen.
Mode 3: Both simultaneously (merged): Både LED-sättningarna på. Sensor fångar ALLA fluoroforer samtidigt. Beroende på exponerings-tid kan bild visas som blandad ”gul-orange” eller separat via post-processing.
32 intensitets-nivåer per LED-set
Varje LED-set har 32 intensitets-nivåer, mjukvara-styrda. Detta möjliggör:
- Balanserad exponering: GFP är typiskt HELLRE (större intensity per fluorofor) än mCherry. Genom att minska 465 nm-intensitet till 20 % och öka 580 nm till 100 % kan operatören balansera signaler.
- Foto-bleknings-management: Långvarig exkitation blekner fluoroforerna permanent. Med lägre-intensitet-exkitation förlängs prov-livslängden.
- Bakgrunds-optimering: Vid låga signal-nivåer kan intensiteten ökas för att förbättra signal-till-brus.
Applikations-scenarion: multiplex-cellbiologi
Scenario 1: Cancer-forskning (protein-samlokalisering)
- Protein-A (tumör-suppressor): märkt med GFP, syns grön.
- Protein-B (onkogen): märkt med mCherry, syns röd.
- Fråga: samlokaliserar A och B (in nucleus, in mitochondria)?
- AM4517MT-GRFBY växlar mellan grön och röd bilder + möjligt bild-överlagring i mjukvara.
Scenario 2: Neurobiologi
- Neuronal cellkropp: märkt med GFP (via viral-transfection).
- Ca²⁺-signalering: mCherry-baserade Ca²⁺-indikator (RCaMP).
- Real-time bildning av neuronal-aktivitet vid Ca²⁺-transienter.
Scenario 3: Stamcell-forskning
- Differentierings-markör 1: GFP.
- Differentierings-markör 2: mCherry.
- Kartläggning av cellulära subtypes i heterogen kultur.
Scenario 4: Immunologi
- T-cell-markör (CD3): FITC-antikropp (grön).
- B-cell-markör (CD19): Alexa 594-antikropp (röd).
- Multi-immune-cell-typing i väv-prover.
Optiska-kanaler-crosstalk
En kritisk designutmaning: hur säkerställs att röd-signal INTE syns i grön-kanalen och vice versa?
Spektralt-selektiva LED: 465 nm-LEDs har smal spektral-utsträckning (~15 nm halv-max-breda). Detta betyder att bara GFP exciteras — inte mCherry (som kräver 580 nm).
Dual-filter design: Filter är designade med SKARPA övergångar mellan 535 nm och 610 nm-området. Ingen ”läckage” mellan grön och röd kanal.
Sensor-linjärt-respons: Standard CMOS är känslig från 400 till 700 nm ungefär linjärt — ingen inbyggd färg-diskrimination. Diskrimination sker via optiska filter, inte sensor-selektivitet.
Trade-offs: single-band vs dual-band
Fördelar med dual-band (denna AM4517MT-GRFBY):
- Multi-färg-avbildning i en enhet.
- Ingen mekanisk filter-rotation.
- Snabb växling (mjukvara, <100 ms).
- Kostnads-effektiv jämfört med multi-filter-mikroskop.
Nackdelar:
- Något lägre signal-till-brus vs dedikerad single-band-instrument (varje band är smalare i dual-filter).
- Ingen samtidig-fångning (simultaneous imaging) — bara sekventiell växling.
- Fast filter-set: kan inte anpassas för alternativa färg-kombinationer (t.ex. GFP + Cy5 skulle inte fungera med detta specifika filter-set).
Multi-färg-fluorescens-schema kompatibla med AM4517MT-GRFBY
Filter-set (505-535 grön / 610-650 röd) fungerar för dessa fluorofor-kombinationer:
| Grön fluorofor | Röd fluorofor | Applikation |
|---|---|---|
| GFP | mCherry | Standard-multiplex |
| FITC | Alexa 594 | Immunfärgning |
| Alexa 488 | Alexa 594 | Multi-antibody-labeling |
| SYBR Green | Ethidium bromide | DNA/RNA gel-elektroforetisk |
| Fluorescein | Rhodamine | Klassisk multiplex-immunfluorescens |
| Fluo-4 (Ca²⁺) | RCaMP (Ca²⁺-röd) | Neuronal-signalering |
FUNGERAR INTE: GFP + Cy5 (Cy5 emission är 660-720 nm, utanför 610-650 nm-bandet).
FUNGERAR INTE: DAPI + GFP + mCherry (DAPI är blå-emission, utanför båda bänder — behöver separat instrument).
Anvendelser
Grundforskning — cellbiologi: Standard-verktyg för multi-protein-lokalisering i celler.
Cancer-forskning: Onkogen/suppressor-samlokalisering.
Neurobiologi: Aktivitet + morfologi-samtidig-avbildning.
Stamcell-forskning: Differentierings-markör-panel.
Immunologi: Multi-cell-typ-fenotypning i vävnad.
Molekylärbiologi: Gel-elektroforetisk-analys med multi-färg-läsning.
Farmakologi: Läkemedelsscreening med multi-target-reportermätning.
Utbildning: Universitets-cellbiologi-labor-demonstration av multiplex-tekniker.
Specifikationer
- Modell: Dino-Lite AM4517MT-GRFBY EDGE PLUS.
- Sensor: 1,3 MP CMOS, 30 fps, 1280×960.
- Exkitations-LEDs: 465 nm (blå) + 580 nm (gul-grön). Växelbar via mjukvara.
- Intensitets-styrning: 32 nivåer per LED-set.
- Emissions-filter: dual-bandpass 505-535 nm + 610-650 nm.
- Automatisk förstoringsavläsning (AMR).
- Hölje: anodiserat aluminium (EMI-skärmning).
- Anslutning: USB.
- Programvara: DinoCapture (ingår).
Vad du får för pengarna
Dino-Lite AM4517MT-GRFBY EDGE PLUS dual-färg-fluorescens-mikroskop, 1,3 MP CMOS-sensor med hög sensitivitet, växelbar exkitation 465 nm (GFP) + 580 nm (mCherry) med 32 intensitets-nivåer, dual-bandpass emissions-filter 505-535 nm (grön) + 610-650 nm (röd), automatisk förstoringsavläsning, anodiserat aluminium-hölje för EMI-skärmning. 12 639 kr.
Standard-verktyget för grundforskning i cellbiologi, cancer-forskning, neurobiologi, stamcell-forskning, immunologi, molekylärbiologi och farmakologi där multi-färg-fluorescens-avbildning krävs. Merprisen över single-band-fluorescens motiveras dramatiskt när prov är multi-taggade — istället för att växla mellan två separata instrument (grön + röd) räcker det med AM4517MT-GRFBY.
Läs mer: Dino-Lite AM4517MT-GRFBY dual-fluorescens i butiken →
